3) 按需包装Lentivirus和Retrovirus载体

按需包装Lentivirus或Retrovirus病毒载体 

载体中心为北京脑中心各实验室科研人员提供Lentivirus或Retrovirus病毒载体的按需包装和浓缩服务。因为Lentivirus和Retrovirus载体多用于特定目的基因的表达，往往无法在各实验室间通用，因此载体中心不储备这两种病毒载体的预包装现货。

为鼓励实验材料共享，载体中心特针对同意共享的Lentivirus和Retrovirus包装服务提供额外优惠。如果同意共享，载体中心将会把申请者提供的包装质粒或包装系统纳入共享库（请务必提供正确图谱）；如果申请者不同意实验材料共享，载体中心将不会保留任何质粒、菌液、或病毒载体备份。

注意：Lentivirus病毒载体需在BSL-2/ABSL-2实验室中操作，请使用者务必遵守国家地方及北京脑中心生物安全相关规范。

Lentivirus和Retrovirus病毒载体包装服务申请流程

    a)   点击进入“载体中心在线服务”-“慢病毒包装”，按需求填写订单并提交。

    b)   载体中心会在第一时间回复邮件以确认服务申请，并以申请表为依据，按照邮件接收顺序尽快安排实验。

    c)   如果申请者自行提供质粒用于病毒包装，请提供含相应Lentivirus/Retrovirus载体质粒或包装质粒的新鲜菌液，由载体中心扩大培养提取质粒进行病毒包装；质粒质量直接影响病毒包装效果，如无特殊原因，不建议申请者直接提供转染用质粒用于病毒包装。受工作量限制，载体中心不接受提供少量质粒以供转化后进行质粒大提，但申请者可申请克隆服务进行质粒转化（按克隆服务收费）。

    注：请务必提前活化细菌，并确认所提供Lentivirus和Retrovirus载体质粒的正确性。 

    d)   如果科研人员需要载体中心进行质粒构建，请申请“按需构建病毒载体克隆”。

    e)  请申请者自备冰盒，按预约时间准时到载体中心实验室（1013室）领取所申请的预包装rAAV病毒载体，并签字登记；如无法按预约时间准时领取，请提前告知。

    f)   包装的Lentivirus或Retrovirus默认不进行浓缩，如需浓缩，请在特别注明（PEG沉淀法）。一般用于体外转导细胞的Lentivirus和Retrovirus无须浓缩，可通过调整病毒载体体积达到合理的感染复数，仅当必须使用高浓度病毒载体时，才需要浓缩病毒。

    g)  载体中心会通过梯度稀释感染法结合qRT-PCR或荧光空斑计数（293T细胞）测定Lentivirus或Retrovirus滴度。qRT-PCR测定结果为基因组拷贝数滴度（genome copy/ml），而非实际感染滴度，基因组滴度通常比实际感染滴度偏高10-100倍。

    注：Lentivirus或Retrovirus包装得率与病毒表达框大小有关。一般一个包装单位在浓缩前可获得~30ml滴度>1×10⁶TU/ml，浓缩后约~300ul滴度>1×10⁸TU/ml的Lentivirus或Retrovirus病毒载体(以Lentivirus/Retro-EGFP为例)。

    h)  病毒包装和滴度测定完成后，载体中心将以邮件的方式通知申请人，相关信息也会在服务申请网站上实时更新。请领取人自备冰盒，按预约时间准时到载体中心实验室（1013室）领取Lentivirus和Retrovirus病毒载体，并签字登记。

    注：领取后请尽快按适合实验需求的体积分装，保存于-80℃并避免反复冻融。 

为更好的进行质量控制以提高服务水平，病毒载体中心对所包装的带荧光病毒感染293T细胞进行测试，请病毒载体使用者务必及时反馈使用该病毒载体的使用情况，反馈内容包括但不限于：病毒载体名称、细胞信息（名称、种类、数量等）、实验动物信息（品系、性别、年龄等）、病毒使用参数（感染复数、滴度、体积、注射脑区、坐标、观察结果时间等）、病毒载体使用结果（荧光信号情况、目标基因表达情况、实验结果）等。因为Lentivirus和Retrovirus载体多用于特定目的基因的表达，往往各实验室无法通用，因此载体中心不储备这两种病毒载体的预包装现货。