载体工程中心BSL-2实验室管理制度

本管理制度规定了北京脑科学与类脑研究中心（CIBR）载体工程中心BSL-2 实验室安全管理的宗旨、目标和制度，本制度同时适用 BSL-1 实验室。

本制度所规定的标准操作规程适用于中心内所有BSL-1、BSL-2 实验室及相关实验室工作人员，包括但不限于CIBR 职工、学生、访问学者、进修和实习人员、临时来访人员及非CIBR后勤保障人员。

病毒载体中心目前允许操作的病原微生物主要包括重组腺病毒伴随病毒（Adeno-associated virus，AAV）载体、重组慢病毒（lentivirus，LV）载体、狂犬病毒（RV）、水泡口炎病毒（VSV）、伪狂犬病毒（PRV）、单纯性疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）。如需操作其它病毒，需向实验室负责人以及有关上级主管部门报备后，经批准方可进行。

标准操作规程

1. 进入控制

只有经培训并获得相关授权的人员方可进入 BSL-2实验室。

实验室门上应张贴国际通用的生物危害警告标志，并标明生物安全水平、实验室负责人和紧急联系电话。

实验室门应保持关闭。

与实验室无关的物品不得带入实验室。

2. 个人防护

在实验室工作时必须使用适合的个人防护设备（如防护服、手套、口罩、帽子等），任何人不得直接穿着个人衣服或普通实验服进入BSL-2 实验室工作区域，必须在缓冲件更衣后，换着BSL-2实验室的实验服进入。

为防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或紫外线的伤害，在必要的情况下须佩戴护目镜、面罩或其它防护设备。

不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。

严禁穿着 BSL-2 实验室专用防护服、手套等防护设备离开BSL-2实验室。

绝不允许用戴着可能已被污染的手套的手触摸门把手、电灯开关、电话、电脑和其它公共设施。

发生手套破损应立即更换。

当 BSL-2实验室中发生病原微生物溅出或溢出后，操作人员必须立即按照应急措施处置，并尽快上报安全管理员。

禁止在BSL-2实验室进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。

禁止在BSL-2实验室储存食品、饮料、以及其他与实验无关的物品。

3. 操作规范

实验室分为污染区、半污染区、和清洁区，以颜色标识区分。上述批准的第三类病原体仅可在污染区中操作，只有密封在已表面消毒过的容器中的污染材料才可拿到半污染区，清洁区不得操作可增殖复制的有活性的病原体。

任何有活性的第三类病原体的操作都应在Ⅱ级生物安全柜中进行。开放式的实验台不允许操作此类病原体。

在BSL-2实验室中操作有活性的第三类病原体时，必须遵守所有BSL-2实验室的操作准则。

在Ⅱ级生物安全柜外操作有活性的第三类病原体时（如：将接种了病毒的细胞培养瓶放到培养箱的过程中），要遵守双层防护的原则。

实验室应保持整洁干净。只有当前正在使用的仪器和物品才可放在实验台上。耗材应贮存在指定的橱子里或架子上，随用随取。

禁止用嘴吸液；必须使用辅助移液装置。

注射器和针头只有在绝对需要时才可使用，用过的针头绝不要重新盖帽或弯折，必须放到专用的利器盒中。

应尽量使用塑料或不易破损的实验器材，玻璃制品只有实验步骤中需要才可使用（比如使用显微玻片等）。

BSL-2实验室的仪器或器材只有经实验室管理员和负责人批准才能拿出实验室。如果无法对仪器进行彻底消毒，则该仪器不建议拿出BSL-2实验室。报废仪器必须经适当手段消毒后才可处理。

在操作过程中要避免产生气溶胶。离心要在防气溶胶的转头中进行。转头只允许在生物安全柜中打开、装载和卸载。必须使用带滤膜的吸头和吸管。

所有的试管、离心管、试剂瓶、培养瓶、培养皿等必须要标记清楚，而且只能放到BSL-2实验室中的培养箱、冰箱或冰柜中。

有活性的第三类病原体除非经实验室负责人许可，否则不许拿出实验室。

中心生物安全执行委员会审核生物安全登记，至少每年1次。

不建议将书籍或实验记录本带入BSL-2实验室。在BSL-2实验室中所做的实验记录，建议通过扫描、照相等形式传出实验室。禁止将污染区的纸张直接带出，如必须带出，建议放入塑料薄中并进行表面消毒。

4. 使用生物安全柜

基于空气动力学的原理，Ⅱ级生物安全柜既能为操作人员提供保护，也为操作样品提供保护。使用生物安全柜时，必须遵守下面的相关规定 ：

开始工作前生物安全柜至少先运转15分钟。

先清洁和消毒生物安全柜，然后再把实验用品放到柜里。

生物安全柜中只摆放本次实验必需的材料及用品。为避免交叉污染，实验室用品拿入生物安全柜以前要用70%酒精进行表面消毒。

在生物安全柜中操作第三类活性病原体时，柜中的所有物品、器材和仪器都要视如污染物处理。

工作结束后要清洁和消毒生物安全柜，每日须利用紫外线照射消毒1个小时（1小时后自动切断）以强化消毒效果。

5. 良好内务行为

为了尽量降低不洁的工作环境、微生物及实验室防护服的不当操作导致的潜在危险，要严格遵守卫生方案。卫生方案包括手部、生物安全柜、实验台、实验室设备、地板、房间和 防护服的清洁与消毒原则。

BSL-2实验室的工作人员在工作结束后要负责清洁用过的工作台面和材料。值日生应每日清洁工作区地面，每周进行一次清理，每月大扫除一次。

6. 废物处置

与上述病毒有关的实验将全部在BSL-2实验室中进行，所产生的液体污染废弃物须收集在专用的有盖密闭废液罐中，当达到容积的3/4时加入适量含氯消毒剂（如次氯酸钙溶液等，有效氯需大于2000mg/L）处理2小时，之后利用75%酒精处理废液罐表面，再移出BSL-2实验室倾倒于实验室废水槽中。

固体污染废弃物（如移液管、培养皿、培养瓶等），均须收集于可高压灭菌的垃圾袋中，损伤性废物（移液器枪头、锐器）收集于有盖耐刺破的黄色利器盒中，封口并利用75%酒精处理表面后，移出BSL-2实验室并立刻置于灭菌锅中进行高压灭菌处理，之后可作为普通实验室废弃物处理。

其它涉及病毒操作的非一次性材料（如超速离心机套筒、离心管等），需利用75%酒精浸泡；可能涉及含病毒液体溢出或飞溅的表面需用75%酒精擦拭。

7. 退出 BSL-2实验室

退出BSL-2实验室以前，实验人员须确认：已清理实验区及实验物品，已妥善处置自己实验产生的废弃物；下班时最后一个离开实验室的实验人员要负责：- 核实所有灯及门已关闭，核实所有未设定继续运转的设备已关闭。如有任何异常情况及事件，实验人员须及时向当值的应急组人员汇报。

8. 加班

CIBR正常工作时间是周一至周五9:00-17:00。如非必要，请尽量避免在正常工作时间以外的时间，包括周末及节假日在BSL-2实验室工作。如果因工作确需加班，应提前告知实验室管理员或安全负责人，并如实登记出入记录。

9. 服务和维护工作

在任何维护工作开始前，实验室安全负责人必须相应的区域/设备进行消毒。并对维护和维修人员告知工作区的潜在生物危险，工作人员须着适当的防护装备（一次性防护服等），在BSL-2实验室合格工作人员的监督下开展工作。

10. 火灾、地震等紧急情况

实验操作必须遵守防火规定。处理小范围火势时，可使用BSL-2实验室内的灭火器（CO₂灭火器）。实验室内设置有热量和烟雾检测系统，以检测未被觉察的火灾或在工作日以外时间发生的火灾。

如果听到楼内警报器响起或红色频闪灯亮起，BSL-2实验室内的工作人员必须立刻撤离（关上生物安全柜的视窗后) 。人员的安全比任何实验更重要！人员可通过缓冲间撤离，也可通过气锁室或紧急出口撤离。如果通过磁力锁打不开门，应使用可突破的玻璃板撤离。

11. 意外事故、飞溅、溢出等应急预案

如遇人员受伤等意外事故，其他人员必须立即向当值的应急组人员、生物安全主管和实验室负责报告。应急小组应监督溢出物的 清扫过程，并决定是否采取进一步的安全措施，以及是否需采取医疗措施。

BSL-2实验室内出现严重病毒污染的情况主要是大量含病毒液体溢出或飞溅。出现这种情况时，需迅速用吸水纸擦拭收集溢出的液体或擦拭飞溅表面，之后利用75%酒精或含氯消毒液擦拭溢出或飞溅区，将吸水纸会擦拭物收集于红色高压灭菌袋中封口表面消毒后灭菌处理。如污染严重，还需利用甲醛或双氧水对整个BSL-2实验室进行熏蒸以全面消毒。

12. 培训

所有实验者都要经过培训合格后，才能在BSL-2实验室种工作。曾经在其它BSL-2及以上防护级别的工作经验不代表已获得准入权，仍需培训后才能进入CIBR的BSL-2实验室工作。培训内容主要包括必要的安全操作技能和学会如何应对紧急事件，培训方式包括BSL-2实验室操作和生物安全教育讲座以及手把手培训。实验者的培训记录和实验室使用批准文件须保留存档。

中心每年均需进行一次适用于中心实验室的生物安全讲座，尾货授权的实验者须参加讲座后方能后的授权，已获授权者也需要重新复习相关知识意识授权继续生效。所有BSL-2实验室合格职工和受训者都必须参加，并且实行签到制度，签到记录由BSL-2实验室负责人保存。

相互的信任、诚意和尊重应成为BSL-2实验室工作人员的核心价值理念，为此，每位实验者有必要也有义务遵从实验室规定，以便在日常工作和紧急情况时都都能够信任同事，也能被同事所信任。

13. 职业健康评估

在所有培训工作开展以前，以及培训合格后的定期培训以前，都要进行职业健康评估，具体参见职业健康评估指导方针。

不建议有免疫抑制问题、呼吸道疾病、及对乳胶、动物或消毒剂过敏的人群在BSL-2实验室工作。怀孕的女职工在BSL-2实验室工作需要特别注意，不建议操作毒性或传染性强、可能影响胎儿的病原和试剂。

14. 违纪处理

违反生物安全指导方针的要求不但可能有损违纪者的个人健康，还可能危及同事和环境。对于严重及反复违反生物安全指导方针的实验者，BSL-2实验室安全责任人要向中心报告并进行处分。

严重违反本生物安全指导方针包括但不仅限于如下情况：

- 无视实验室和个人卫生的相关规定。如在实验室内吃东西或喝饮料，每次使用生物安全柜后不进行消毒。在退出实验室前不洗手或消毒。

- 不覆行公共义务，如不高压废弃物、不添充消耗品和不参与实验室常规的清洁工作。

- 不遵守来访者的规定，如在未经BSL-2实验室安全责任人许可的情况下，让朋友、家人或服务维修人员进入实验室，或使来访者脱离监督留在实验室。

- 不及时处理、并向应急组报告意外事故或感染性材料的溢出。

- 在因安全原因关闭实验室期间进入实验室。